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复合维生素制剂中的烟酰胺测定——分光光度法

来源：- 浏览：122 更新时间：2011年12月02日

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1. 原理
在pH约4.5处将烟酰胺抽提到KH2PO4溶液中，再与CNBr和巴比士酸反应。用分光光度法测定反应产物。烟酸含量超过烟酰胺3倍量时干扰烟酰胺测定。
2. 适用范围
选自AOAC，适用复合维生素制剂检测。
3. 仪器
（1）搅拌器。
（2）量筒。
（3）锥形瓶。
（4）高压釜（121℃，15min）。
分光光度计（550nm）。
4. 试剂
所用试剂皆为分析纯；所用水皆为蒸馏水。
（1）烟酰胺标准溶液：
① 标准贮备液（250μg/mL）：50mg USP烟酰胺标准加60％乙醇溶解并稀释到200mL。在10℃贮存。
② 标准工作液（5μg/mL）：将少量贮备液温热至室温。取出2mL用0.3％KH2PO4溶液稀释至100mL。
（2）溴化氰溶液：10％，将370mL H2O温热至40℃，并加入40g CNBr。振荡至溶解冷却并稀释至40mL。溶液在冰箱保存。使用前需恢复到室温[注意：CNBr剧毒，切勿与皮肤接触，注意在通风橱中操作]。
（3）磷酸二氢钾溶液：
① 13％的磷酸二氢钾溶液：将30g KH2PO4用蒸馏水溶解并稀释到1L。
② 0.3％的磷酸二氢钾溶液：将3％的磷酸二氢钾溶液用蒸馏水稀释（1＋9）。
（4）巴比士酸缓冲液：按每批测定需用量计算，按每100mL3％KH2PO4溶液加2g试剂级巴比士酸制备。搅拌1h，用前过滤。
5. 操作步骤
（1）样品制备：取适量样品于锥形瓶中，加入0.3％的KH2PO4（KH2PO4的量至少是估计的烟酰胺量的2倍）。若样品不易溶解，则振摇使其分散并用高压釜在121℃下加热15min。用0.3％ KH2PO4溶液稀释至5μg/mL，过滤。
（2）用蒸馏水代替CNBr分别制备各样品的空白。将1mL工作标准液或测定液置于分光光度计比色管中。加0.5mL CNBr溶液，混匀，塞住，放置25～30min，加10mL巴比士酸溶液并旋摇[注意：若30min后不能加巴比士酸溶液。将管置于碎冰浴中稳定CNBr反应]。
用蒸馏水代替CNBr作为适当的空白，（550nm，分光光度计设定在OA）颜色最深时测定反应产物的吸光度[注意：① 加入巴比士酸后2～4min时颜色最深，稳定约1min，慢慢退去。② 测定样品时，其放置时间不应超过30min。加入CNBr时应有规律的间隔1～2min]。
6. 计算
样品中烟酰胺含量＝（A×5×稀释倍数）/（A’×1000）（mg）
式中 A——样品吸光度；
A’——标准吸光度；
5——μg烟酰胺/mL标准工作液。
[注意：一般此方法主要用于药片的检测，所以用烟酰胺mg/片报告]
7. 注意事项
（1）CNBr有毒，应在通风橱中操作。
（2）样品中烟酸含量超过烟酰胺含量的3倍量时会干扰烟酰胺的测定，因此样品应有明确的烟酸和烟酰胺的含量。
（3）试管应先用洗衣粉清洗后，用水冲净，再放入酸缸中浸泡1d左右，捞出后再用自来水和蒸馏水清洗干净，晾干，方可再用。

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