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粗多糖的检验方法

来源：- 浏览：279 更新时间：2011年12月02日

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1、方法原理
粗多糖在硫酸的作用下，水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，与苯酚
缩合成有色化合物，用分光光度法测定样品在粗多糖含量。
2、主要设备和仪器
设备721型分光光度计（上海第三分析仪器厂）
试剂
葡萄糖标准液：精确称取105℃干燥恒重的标准葡萄糖0.1000g，置100mL容量瓶中加热蒸馏水溶解稀释至刻度，其浓度为1.0mg/mL，用稀释成浓度为0.1mg/mLd的标准工作液。
5%苯酚溶液：取苯酚100g，沙浴蒸馏，收集180℃-182℃溜分，称取此馏分5g，用水溶解后，定容至100mL棕色容量瓶中备用（现用现配）。
3、测定步骤
3.1、最大吸收波长的选择
精密吸取0.04mg/mL无水葡萄糖溶1.0 mL，置10mL具塞试管中，加入蒸馏水使体积为2.0mL，再加苯酚试液1.0mL，摇匀，迅速滴加浓硫酸5.0mL，摇匀后放置5min，置沸水浴中加热15min，取出后冷却至室温。以蒸馏水代替糖溶液如加上法配制空白。用721分光光度计在470-510nm测定吸光度，测定最大吸收波长为490±nm。
3.2、标准曲线的绘制
精密吸收浓度为0.1mg/mL的葡萄糖标准标准工作液0、0.20、0.30、0.40、0.60、0.80mL，分别置于10mL具塞试管中，各加蒸馏水使体积为2.0mL，再加苯酚试液1.0mL，摇匀，迅速滴加浓硫酸5.0 mL，摇匀后放置5min，置沸水浴中加热15min，取出后冷却至室温。以蒸馏水代替糖溶液如上法配制空白。用721分光光度计，1cm比色皿，在490nm处测定吸光度，绘制葡萄糖浓度-吸光度工作曲线。结果浓度在0.010-0.04mg/mL范围内与吸光度呈现性关系。
回归方程Y=7.52×10-3X+1.13×10-3, Y=0.9997(n=6)。
3.3、含量测定
3.31、多糖的提取与精制取300mL，用氟仿多次萃取，以除去蛋白质，加活性炭1%脱色，抽滤，滤液加入95%乙醇，使含醇量达80%，静置过夜。过滤，残渣用无水乙醇、丙酮、乙醚多次洗涤，真空干燥，即得粗多糖。
3.32、供试液的配制精密称取粗多糖粉末0.2000g，置于50mL容量瓶中，定容，摇匀，即得供试品溶液。
3.33、样品含量测定精密度吸取供试品溶液2.0mL，按“标准曲线绘制”项下方法分别测定吸光度。
结果计算：
多糖含量（%）=（C·D）/V×100
式中：
C－供试液葡萄糖浓度（mg/mL）；
D－代试液的稀释因素；
V－供试液体积（mL）。

来源:医药网-虎网医药-药械-资讯网 ( 责任编辑:sundy )

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