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保健食品中异麦芽低聚糖、低聚果糖、大豆低聚糖的测定方法

来源：- 浏览：98 更新时间：2011年12月02日

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1 范围
本标准规定了保健仪器中异麦芽低聚糖、低聚果糖、大豆低聚糖的测定方法。
本标准适用于保健食品（糖浆、糖粉、奶粉）中异麦芽低聚糖、低聚果糖、大豆低聚糖的测定。
本方法最低检出量：异麦芽糖2μg；潘糖5μg；异麦芽三糖10μg；GF25μg；GF35μg；GF45μg；棉籽糖20μg；水苏糖30μg。
2 方法提要
样品除去蛋白后，离心、脱色，用液相色谱分析，用NH2柱分离，示差检测器测定，外标法定量。
3 试剂
所用试剂除注明外均为分析纯
3.1 乙晴（色谱纯）。
3.2 无水乙醇。
3.3 水（石英亚沸蒸馏）
3.4 麦芽糖、异麦芽糖、潘糖、麦芽三糖、异麦芽三糖、棉籽糖、水苏糖（含量≥98%），购于sigma试剂公司。
3.5 低聚果糖（总含量≥96%，其中GF238%，GF351%，GF47%）由华北药厂提供。
3.6 麦芽糖、异麦芽糖混合标准溶液：分别称取麦芽糖10.0mg，异麦芽糖15.0mg，潘糖9.0mg，麦芽三糖15.0mg，异麦芽三糖12.0mg，用水溶解，并定容至1.0mL。将此溶液逐级稀释成下列浓度：
标准溶液名称：

标准溶液名称：	麦芽糖、	异麦芽糖、	潘糖、	麦芽三糖、	异麦芽三糖（mg/Ml）
1	0.50	0.75	0.45	0.75	0.60
2	1.00	1.50	0.90	1.50	1.20
3	2.00	3.00	1.80	3.00	2.40
4	10.00	15.00	9.00	15.00	12.00

3.7 低聚果糖标准溶液：精密称取含GF238%、GF351%、GF47%的低聚果糖标准品0.500g，用水溶解并定容至2.50mL。将此液逐级稀释成下列浓度：

标准溶液名称：	GF₂	GF₃	GF₄（mg/mL）
1	1.50	2.00	0.30
2	3.00	4.00	0.60
3	4.50	6.00	0.90
4	6.00	8.00	1.20
5	7.50	10.00	1.40

3.8 棉籽糖、水苏糖标准溶液：精密称取棉籽糖0.0400g，水苏糖0.0600g，用水溶解并定容至4.0mL。将此液逐级稀释成下列浓度：

标准溶液名称：	棉籽糖	水苏糖	（mg/mL）
1	2.00	3.0
2	4.0	6.0
3	6.0	9.0
4	8.0	12.0
5	10.0	15.0

由于样品中程度不同的含有葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖，所以在配制标准应用液时可加入适量的葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖，主要是用于定性。
将各标准系列注入高效液相色谱仪进行测定，绘制标准工作曲线。
4 仪器
4.1 高效液相色谱仪（附带示差检测器）。
4.2 离心机：10000r/min。
4.3 分析天平：1/10000。
4.4 分析天平：1/1000。
5 分析步骤
5.1 试样制备
5.1.1 糖浆和糖粉，称取1.0000g糖浆或0.2000g糖粉，用水稀释或溶解，并定容置10.0mL，摇匀，溶液过0.45μm滤膜，滤液用于HPLC测定。
5.1.2 不含乳液体饮料：饮料直接离心，上清液过0.45μm滤膜，滤液用于HPLC测定。
5.1.3 含乳液体饮料：取10.0mL样品放入烧杯中，加无水乙醇30mL，搅拌混匀，5min，离心，取上清液20mL在沸水浴上挥发近干。残液用于溶解并定容至5-10mL，溶液过0.45μm滤膜，滤液用于HPLC测定。
5.1.4 奶粉：称取2.000g样品，放入200mL烧杯中，加水15.0mL溶解，再加45.0mL无水乙醇，搅匀，放置5min，离心，取上清液30.0mL在沸水浴上挥发近干，残液用水溶解并定容至一定体积，溶液过0.45μm滤膜，滤液用于HPLC测定。
5.2 高效液相色谱参考条件
5.2.1 色谱柱：不锈钢柱，内径4.6mm×300mm HYPERSIL-NH2 5μm（大连依利特科学有限公司）。
5.2.2 柱温45℃，检测室40℃。
5.2.3 流动相：乙晴+水=76+24
5.2.4 流量：1.5mL/min。
5.2.5 灵敏度：64
5.2.6 进样量：20μL
5.2.7 在上述色谱条件下注入标准溶液和样品溶液，以保留时间定性，外标法定量。
6 计算
按下列公式计算

式中：X：样品中某低聚糖的含量，g/kg（g/L）。
A：样品的峰面积或峰高。
Ci：某低聚糖标准溶液的浓度，mg/mL。
Ai：标准溶液的峰面积或峰高。
M：样品质量，g（mL）。
V：样品定容体积，mL。
结果的表述：结果保留小数点后两位数
注：功能性异麦芽低聚糖的含量=异麦芽糖+潘糖+异麦芽三糖。因四糖、五糖标准不易买到，在异麦芽三糖后面的峰则按异麦芽三糖计算。
7. 允许差
同一实验室，平行测定两次结果的相对偏差不得超过10%。
8. 准确度
准确度以回收率表示。
将某种低聚糖加入糖浆，饮料或奶粉中，做回收率实验，回收率应在90%~104%范围内。
9 其他
色谱柱的转换步骤：
（1）1mL/min异丙醇，20min；
（2）1mL/min水，20min；
（3）2mL/min0.1mol/L H3PO4（pH~1.5），30min；
（4）2mL/min水，100min；
（5）2mL/min流动相（大约80%乙晴+20%水），30min。
10 色谱参考图

来源:医药网-虎网医药-药械-资讯网 ( 责任编辑:sundy )

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