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熊去氧胆酸的测定方法（高效液相色谱法）

来源：- 北极虎网浏览：341 更新时间：2011年12月01日

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本方法适用于熊胆制品中熊去氧胆酸的测定。
本方法熊去氧胆酸的最低检出量为20ng。
1. 方法提要
熊胆制品中的熊去氧胆酸用流动相甲醇+0.03mol/L磷酸盐缓冲液（66+34）提取，以高效液相色谱法于205nm波长处测定，以保留时间定性、峰面积定量。
2. 仪器
（1）LC-4A高效液相色谱仪（Shimazdu，日本），C-RIB色谱处理机。
（2）检测器：SPD-2AS紫外检测器。
（3）离心机（3000r/min）
（4）超声波清洗器。
（5）微孔过滤器（滤膜0.45μm）。
3. 试剂
（1）甲醇（色谱纯）。
（2）磷酸氢二钠（优级纯）。
（3）水（二次蒸馏水）。
（4）熊去氧胆酸标准品（中国药品生物制品检定所）。
（5）标准溶液：准确称量熊去氧胆酸10mg置于5mL容量瓶中，用上述流动相溶解、摇匀，配制成2mg/mL的标准溶液。
4. 测定步骤
（1）样品处理：
a. 固体样品：准确称取粉末状样品20mg，置离心管中，准确加入流动相5mL，超声处理10min，离心（3000r/min, 10min），取上清液通过微孔滤膜（0.45μm）弃去初滤液，续滤液供测定样品含量用。
b. 液体样品：准确吸取一定量液体样品直接经微孔滤膜过滤后备用。
（2）色谱分离条件：
色谱柱：Shim-pack CLC-ODS, 6mm×150mm, 5μm。
流动相：甲醇+0.03mol/L磷酸盐缓冲液（66+34），Ph4.70~4.80。
流速：0.8mL/min。
柱温：40℃。
检测波长：205nm。
灵敏度：0.016AUFS。
进样量：10μL
（3）样品测定：准确吸取样品处理液和标准液各10μL（或相同体积）注入高效液相色谱仪进行分离，以其标准溶液峰的保留时间定性，用其峰面积求出样液中被测物质的含量。
标准色谱图见图2-35，样品色谱图见图2-36。

5. 结果计算

式中 X——样品中熊去氧胆酸的含量（mg/100g或mg/100mL）；
S1——样品峰面积；
c——标准溶液浓度（mg/mL）；
S2——标准溶液峰面积；
V——样品定容体积（mL）；
m——试样质量或体积（g或mL）。
6. 注释
（1）本法在熊去氧胆酸浓度为0.2~1.6mg/mL范围内呈直线关系，线性方程为：y=0.9823x－0.0101，r=0.9992。
（2）同一样品重复测定6次，其结果RSD=2.3%。
（3）样品中标准添加平均回收率为97.5%。

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