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前花青素的测定方法

来源：- 北京虎网浏览：225 更新时间：2011年12月01日

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前花青素是用水从法国沿海松树皮中提取出来的，并经过干燥的提取物的主要成分。
鉴定：
1. 颜色反应：反应后颜色为深红色。
将50mg的样品溶于1ml浓盐酸和4ml乙醇的混合溶液中，然后加热，直到混合溶液的颜色变为深红色为止。
2. 薄层色谱法：
吸附剂：硅胶60F251
展开剂：乙酸乙酯：甲酸：水=18：1：1（体积比）
显色：将磷酸和乙醇按（1：1）的体积比混合，再加入1%的香草醛，喷雾薄层板，加热1分钟，只出现前花青素的红色斑点，继续加热15分钟后，各种单体全部显色。
样品：将样品配成25mg/mg的甲醇溶液，取5μl点于薄层板上。
薄层色谱图谱
Rf 0.62 儿茶素
0.55 前花青素二聚体
0.41 前花青素二聚体
0.34 前花青素三聚体
0.26 前花青素四聚体
0－0.2 前花青素寡聚体
前花青素含量（Porter 试验）
一、原理：
前花青素是含有儿茶素和表儿茶素单元的分子，它氧化水解后能够生成红色的花青素离子。前花青素本身没有颜色，但是经过用热酸处理后，可以生成深红色的花青素离子。Porter试验能够定量测定前花青素在水解过程中生成的花青素离子。
二、方法：
试剂：甲醇正丁醇盐酸 NH4Fe（SO4）2·12H2O
仪器：分光光度计。
将10mg样品溶于10ml甲醇中。
取上述样品溶液1ml，用甲醇稀释至10ml为待测检液。
将正丁醇与38%的盐酸按照95：5的体积比混合后，取出6ml；将NH4Fe（SO4）2·12H2O用浓度为2mol/L的盐酸按照2%（W/V）的比例配制，取出0.2ml，连同前面的6ml一同加到1ml待测检液中，在加盖密封的玻璃容器中（离心管）用沸水浴加热40分钟。如果对加盖的试管进行加热有麻烦的话，可以在沸水浴加热回流。精确加热40分钟后，立即用冰水冷却试管。在加热完毕后15分钟，于546nm处测吸光度。
前花青素所战百分素=
0.01389－反应混合物中样品的浓度 mg/ml。
0.366－A1%1cm在546nm处前花青素的吸光度。

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