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氯化高铁血红素的测定方法（分光光度法）

来源：- 北京虎网浏览：928 更新时间：2011年12月01日

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本方法适用于食品中氯化高铁血红素的测定。
本方法氯化高铁血红素的最低检出限为0.15μg/mL。
1. 方法提要
氯化高铁血红素系以新鲜猪血经冰醋酸法提取加工而成的动物性补铁剂，能被人体黏膜上皮细胞分解为原卟啉及二价铁，从而进入血液被机体吸收和利用。氯化高铁血红素制品以氢氧化钠溶液溶解和定容后，以1cm比色杯于波长385nm处进行检测，与标准溶液比较进行定量。
2. 仪器
722型分光光度计。
3. 试剂
（1）氯化高铁血红素标准品（Sigma公司）。
（2）0.1mol/L氢化钠溶液。
4. 测定步骤
（1）样品处理：
a. 固体样品（胶囊或片剂）：准确称取一定量样品，一边研磨，一边中入0.1mol/L氢化钠溶液，使氯化高铁血红素充分溶解溶解（注意不能加热溶解，否则引起结果偏高），定容后备检测。
b. 液体样品，摇匀后准确吸取一定量样品用0.1mol/L氢化钠溶液稀释后待测定。
（2）标准曲线的绘制：准确称取经105℃干燥至恒重的氯化高铁血红素标准品10.00mg，用0.1mol/L氢化钠充分溶解并定容至100mL容量瓶中。吸取此储备液10mL加于100mL容量瓶中，加入0.1mol/L氢化钠定容至刻度，摇匀，配成10μg/mL的标准使用液。分别准确吸取标准使用液0.0、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0至10mL比色刻度试管中，加0.1mol/L氢化钠至刻度，以零管作空白调零，于385nm处测定吸光度，并绘制氯化高铁血红素含量-吸光度标准曲线。
氯化高铁血红素浓度为1.2μ~7.0μg/mL范围内吸光度与浓度呈直线关系，y=0.07566x+3.712×10-3，r=0.9995。
（3）样品测定：取上述样品处理液依照标准曲线标准操作步骤测定385nm处的吸光度值，依据标准曲线查得氯化高铁血红素含量。
5. 结果计算
样品中氯化高铁血红素含量，依据下列公式计算：

式中 X——样品中氯化高铁血红素含量（mg/100g或mg/100mL）；
m——样品质量（g或体积mL）；
V1——样品分取体积（mL）；
V2——样品定容体积（mL）；
m1——样品及光度值依据标准曲线查得的氯化高铁血红素的量（μg）测
定结果保留三位有效数字。
6. 准确度与精密度
重复测定同一样品6次，其相对标准差（RSD）为2.1%；口服液样品标准添加回收率为93.1%~98.7%；固体样品为93.7%~95.4%。

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